В конце 60-х — начале 70-х гг. в большинстве работ, посвященных функ-ционированию макрофагов, использовалась модель иммуногенности макрофагов in vivo. Макрофаги инкубировали с радиоактивно меченным антигеном (например, с 1311-гемоцианином) и через разное время после инкубации вводили син-генным реципиентам, исследуя их способность индуцировать синтез антител [44, 45]. Часть макрофагов инкубировали in vitro, и через разное время определяли количество 1311-меченого антигена, остающегося в клетках или выделяемого в среду. Антигены вначале связывались с клеточной поверхностью, а затем поглощались в составе мембранных пузырьков и быстро подвергались катаболизму. Около 80% антигена, первоначально связавшегося с клеткой, деградировало; большая часть катаболизированного антигена позднее обнаруживалась в культуральной среде в виде 1311-аминокислот (табл. 5.6). В то же время оставшиеся 20% связанного клетками антигена избегали первоначальной дегра-дации и оставались ассоциированными с кле ...

Бычий и бараний инсулины имеют совершенно одинаковую третичную структуру и различаются лишь одной аминокислотой (остаток 9 в А-цепи). Клоны индукторных клеток мыши, иммунизированной бычьим инсулином, активируются под действием бычьего, но не бараньего инсулина; клоны, полу-ченные от мышей, иммунизированных бараньим инсулином, обладают обратной специфичностью. Эти данные наряду с другими показывают, что индукторная Т-клетка может отличить ассоциированные с молекулой класса II белки, раз-личающиеся всего по одной аминокислоте [65].
Хотя ясно, что специфичность активации индукторных клонов исключи-тельно высока, значительно хуже доказано, что эти клоны синтезируют рас-творимые белки, способные различать два антигена, не связанные с молекулами класса II. Одной из причин, дающих основание подозревать, что такие индукторные молекулы могут играть роль в антиген-специфической стимуляции В-клеток, служат результаты исследования молекул, синтезируемых и, вероятно, секретируемых клонами ...

Монослой макрофагов, полученных из различных лимфоидных органов или из перитонеального экссудата, связывает тимоциты в значительно большей степени, чем полиморфно-ядерные лейкоциты или фибробласты. Лимфоциты из лимфатических узлов или перитонеального экссудата прикрепляются к моно-слою макрофагов в значительно большем количестве, чем ксеногенные тимоциты или лимфоциты [68]. Таким образом, по-видимому, существует некоторая специфичность взаимодействия, возможно указывающая на существование неких клеточных механизмов распознавания. Не было обнаружено никакой избирательности по отношению к В- и Т-лимфоцитам: они связывались с макрофагами пропорционально их содержанию в популяции лимфоцитов. Изменение поверхностных lg В-лимфоцитов не подавляло связывания; не было обнаружено также конкурентного угнетения связывания избытком lg.

Для антигеннезависимого взаимодействия макрофагов с лимфоцитами тре-бовались живые макрофаги, в то время как роль лимфоцитов была настолько пасси ...

Разработка воспроизводимых и надежных методов оценки антиген-специ-фической активации Т-клеток позволила провести аналогичные исследования in vitro. Как и раньше, поглощение белковых антигенов макрофагами определяли с помощью радиоактивных изотопов, а иммуногенность оценивали по способности инкубированных с антигеном макрофагов активировать пролифе-рацию иммунных Т-клеток in vitro. Хотя результаты исследований in vivo и in vitro в целом были сходны, обнаружился также и ряд отличий, частично изменивших наши представления о процессинге антигена в макрофагах.

Макрофаги, инкубированные с растворимыми белковыми антигенами in vitro, накапливали иммунологически активный антиген по двухступенчатому механизму [48]. Первый этап включал связывание молекул антигена с поверх-ностью макрофагов; этот этап не зависел от температуры. Потенциальная имму-ногенность молекул антигена, связавшихся с поверхностью макрофагов во вре-мя инкубации при 4° С, полностью подавлялась трипсинизацией ма ...

Изотипы slg-дол гожи ву щи х клеток памяти были исследованы в нескольких лабораториях. Согласно общепринятому мнению, предшественником IgG-АОК среди долгоживущих примированных В-клеток является IgG-популяция [89]. Кроме того, sIgM+IgG+-nonyflH4HH клеток памяти может давать АОК, продуцирующие и IgM, и IgG [92]. Среди фенотипов Ig, обнаруженных в прими-рованных популяциях, имеется sIgD+; такие клетки, вероятно, несут также и поверхностные IgG [89, 90].В ряде экспериментов с длительно культивируемыми примированными клетками сравнивали способность определенного числа клеток давать вторичный IgM- или IgG-ответ. Данные, касающиеся относительного вклада каждой из субпопуляций в общий ответ, весьма разрозненны. Юан и др. [92] обнаружили, что две трети вторичного IgG-ответа определяются ^0+-клетками, а оставшаяся одна треть — клетками, несущими и IgM, и IgG, или клетками, имеющими на своей поверхности IgD. С помощью метода селезеночных колоний Тил и др. [57] показали, что примерно пол ...

Данные о взаимосвязи между slg и FcR противоречивы. Большинство имеющихся в литературе данных было получено в экспериментах, связанных с изучением кокэппинга slg и FcR. Часто кэппинг slg или образование выпуклых полосок slg («stripping») на поверхности мышиных лимфоцитов, вызываемых aHTH-Ig-антителами или их Р(аЬ)2-фрагментами, сопровождаются кокэп-пингом FcR [159]. Однако имеются и противоположные сообщения, согласно которым кэппинг slg, наблюдаемый после добавления анти-Ig, не изменяет диффузного характера распределения FcR [145, 146]. Это противоречие, вероятно, обусловлено количественными, а не качественными различиями, поскольку были описаны случаи выявления остаточных FcR в результате их неполного кэппинга. Так, Юнануе и Эббас [159] продемонстрировали наличие кокэппинга FcR с slg на поверхности лимфоцитов, используя интактные анти-х; с F (ab)2-анти-х кокэппинг был выражен в меньшей степени, хотя наличие некоторого кокэппинга было очевидным. Кроме того, Бает и др. [160] обнар ...

Вместо трудоемких функциональных анализов специфичности Т-лимфоцитов для характеристики Т-клеточных рецепторов можно применить альтернативный подход, заключающийся в изучении связывания антигена Т-лимфоци-тами. В данном разделе мы опишем эксперименты, поставленные с целью про-демонстрировать связывание антигена Т-клетками; затем мы рассмотрим связы-вание антигена белками-продуктами Т-клеток.

Если бы было возможно продемонстрировать связывание антигена неболь-шой частью Т-лимфоцитов и при этом можно бы было показать, что Т-клетки, которые связывают антиген, также ответственны и за различные реакции Т-клеток на этот антиген, то у нас имелся бы способ характеристики специфичности связывания антигена Т-клетками. Этот подход был успешно использован для изучения В-клеток и помог установить, что антигенные рецепторы данной В-клетки неотличимы по своим антигенным свойствам и по способности связывать антиген от секретируемых той же клеткой иммуноглобулинов. Попытки продемо ...

С помощью метода адоптивного переноса было показано, что на Т1-анти-гены отвечают как sIgM+IgD ~- [82], так и sIgM+IgD +-клетки [83], Относительный вклад каждой субпопуляции зависит, вероятно, от иммунологической «предыстории» животного-донора, поскольку недавние исследования показали, что неспецифическая стимуляция может быстро изменять фенотип реагирующих клеток, превращая их из sIgM+IgD~ в sIgM+IgD+ [84]. В экспериментах in vitro было обнаружено, что даже при использовании В-клеток новорожденных животных, у которых большая часть этих клеток представлена субпопуляцией sIgM+IgD~, ответ в основном определяется sIgM+IgD-raeTKaMH [66, 83]. С другой стороны, применение метода лимитирующих разведений позволило заключить, что в ответе принимают участие как sIgM+IgD~-, так и sIgM+IgD+-cy6nony-ляции, хотя частота предшественников среди sIgM+IgD~-mieTOK ниже [85].

Таким образом, любой из способов определения позволяет наблюдать ответ sIgM+IgD+-raeTOK на TI-антигены. Что каса ...

В-клетки новорожденных чрезвычайно чувствительны к индукции толе-рантности [96], а также к инактивации с помощью анти-ц-антител [97]. Эти наблюдения согласуются с гипотезой о том, что для приобретения устойчивости к индукции толерантности В-клетками, отвечающими на TD-антигены, необходима экспрессия slgD, поскольку появление slgD коррелирует с потерей чувстви-тельности к индукции толерантности [98]. В пользу этой теории свидетельствуют эксперименты, показавшие, что в результате удаления slgD либо гидролизом папаином [99], либо предварительной обработкой клеток анти-6-сыворот-кой (но не анти-р,) [100] зрелые В-клетки могут стать чувствительными к индукции толерантности. Наоборот, в других опытах, в которых исследовали вос-приимчивость к толерантности разделенных sIgD+-и slgD "-субпопуляций, было обнаружено, что эти субпопуляции идентичны [85, 87]. Действительно, как было продемонстрировано с помощью метода селезеночных колоний, крайне высокая чувствительность к индукции толерантност ...

Хотя описанные механизмы, обеспечивающие избирательность локализации лимфоцитов, действуют независимо от антигена, введение антигена может оказывать существенное влияние на перемещение этих клеток. Одно из наиболееранних проявлений воздействия антигена, наблюдаемое в первые часы после стимуляции, сводится к увеличению кровотока через стимулированную ткань [54, 55]. Ток крови в месте локального воспаления в коже или в стимулирован-ном лимфатическом узле может возрасти в 10—25 раз по сравнению с нормаль-ным уровнем — в результате сильно увеличивается и количество лимфоцитов, движущихся через воспаленную область. Некоторые антигены еще больше увеличивают накопление лимфоцитов, вызывая временную задержку их выхода из стимулированных лимфатических узлов (см. обзор [55]). В течение 5—7 дней после антигенной стимуляции размер лимфатического узла может увеличиться в 15 раз, что, вероятно, в значительной степени обусловлено измененным движе-нием лимфоцитов. Не исключено, что такое неспецифичес ...